深海魚油是指從深海中魚類動物體中提煉出來的不飽和脂肪成分，分別為EPA和DHA。魚油是指富含EPA(二十碳五烯酸）、DHA(二十二碳六烯酸）的魚體內的油脂。普通魚體內含EPA、DHA數量極微，只有寒冷地區深海里的魚，如三文魚、沙丁魚等體內EPA、DHA含量*，而且陸地其他動物體內幾乎不含EPA、DHA。因此選用深海魚來提練EPA及DHA。
作用功效
1、調節血脂，清理血栓，防止血液凝固，預防腦血栓、腦溢血及中風。
2、預防關節炎、緩解痛風、哮喘，暫時緩解由關節炎引起的腫痛。
3、預防老年癡呆癥、營養大腦、改善記憶。
4、改善視力、防治老花眼。
5、維護視網膜。
隨著消費者需求量的不斷增加，市場上魚油制品層出不窮，但其有效成分EPA、DHA含量存在較大差異，因此，建立魚油制品中EPA與DHA的快速檢測方法，識別假冒產品，具有一定的意義。
一、實驗部分
1.1
儀器及材料
安捷倫氣相色譜儀7820a（附氫火焰離子化檢測器）
1.2 色譜條件
色譜柱：Alltech EC-1000，30m×0.25mm×0.25μm；色譜柱溫度：198 ℃恒溫3 min，以10 ℃/min升溫至248 ℃，維持12 min；進樣口溫度：280 ℃；FID檢測器溫度：280 ℃；進樣方式：分流，分流比30:1；進樣量：1μL；載氣：氮氣。
1.3 試劑
EPA/DHA甲酯標準品(純度≥99％)，內標物——二十三碳酸甲酯標準品(純度≥99％)，均購于美國SIGMA公司。2 mol/L氫氧化鉀－甲醇溶液。正庚烷、甲醇均為色譜純、氫氧化鉀為分析純。
1.4 操作步驟
1.4.1 標準溶液制備
DHA甲酯、EPA甲酯、二十三碳酸甲酯標準樣 品：均配制成濃度為1.0 mg/mL的正庚烷溶液。 1.4.2 樣品制備[4] 稱取試樣500 mg至具塞試管中，用移液管移取5 mL正庚烷溶解試樣，用移液管移取2 mL氫氧化鉀—甲醇溶液，蓋上玻璃蓋猛烈振搖1 min后，加蒸餾水至試管頸部，置于離心機以3000 r/min離心5 min，移取2 mL上清液至具塞試管，加入2 mL內標液，定容置10 mL，供上機測定。以標準品保留時間定性，由相對質量校正因子來定量計算魚油樣品中的EPA和DHA含量。
1.4.2 樣品制備
稱取試樣500 mg至具塞試管中，用移液管移取5 mL正庚烷溶解試樣，用移液管移取2 mL氫氧化鉀—甲醇溶液，蓋上玻璃蓋猛烈振搖1 min后，加蒸餾水至試管頸部，置于離心機以3000 r/min離心5 min，移取2 mL上清液至具塞試管，加入2 mL內標液，定容置10 mL，供上機測定。以標準品保留時間定性，由相對質量校正因子來定量計算魚油樣品中的EPA和DHA含量。
1.4.3 結果計算
對所得的色譜圖，以內標法進行結果計算：
式中：AX—EPA、DHA的峰面積；AIS—內標峰的峰面積；
FX—EPA或DHA的校正因子；WIS—樣品中內標物的加入量(mg)；WS—樣品量(mg)；FW—EPA、DHA甲酯換算成EPA、DHA的換算因子，EPA=1.105，DHA＝1.096；25—樣品前處理過程中稀釋倍數。
二、結果討論
2.1 樣品前處理方法的選擇
油脂中脂肪酸的測定通常需要甲酯化處理，常用的甲酯化方法有三氟化PENG法、*基氫氧化硫（TMSH）法、甲醇鉀法、重氮甲wan、鹽酸/甲醇、硫酸/甲醇和氫氧化四甲胺/甲醇等[5]。本文主要用氫氧化鉀/甲醇法，針對性檢測魚油制品中的EPA與DHA，該法具有操作簡單、快捷的特點。 2.2 EPA甲酯和DHA甲酯的色譜分離
深海魚油樣品加入內標C23:0甲酯的氣相色譜圖見圖1
由圖1可見，EPA甲酯、DHA甲酯和C23:0甲酯 的保留時間分別為12.898 min、18.052 min、14.785 min，三種脂肪酸甲酯分離良好，并且其余組分不干擾測定。
2.3 校正因子的測定
采用內標法測得EPA甲酯和DHA甲酯對內標C23:0甲酯的相對質量校正因子，結果見表1。
2.4 方法精密度
取同一深海魚油樣品5份，按1.4.2所述步驟測定，1.4.3定量分析，得EPA和DHA的精密度，結果見表2。
2.5 EPA和DHA的回收率
于100 mg的深海魚油樣品中分別加入一定量的EPA和DHA，按1.4.2所述步驟測定，1.4.3定量分析，進樣次數為5次，測定結果見表3。
2.6 樣品測定
對3種市場上銷售的深海魚油樣品進行測定，測定結果見表4。由表4可知，樣品1中EPA、DHA含量比標稱數據明顯偏低，樣品2、3中EPA、DHA含量與標稱數據基本吻合。
三、結論
內標法是氣相色譜當中一種比較理想的定量方法，它要求內標物與被分析物質的化學性質要相似，而對操作條件要求不高，內標法是測定脂肪酸含量的方便準確的定量方法。一般通常使用C17:0等單飽和脂肪酸甲酯作為測定脂肪酸的內標物，其保留時間與EPA和DHA的保留時間相差較大。使用二十三碳飽和脂肪酸甲酯作為測定EPA、DHA的內標物，其性質和EPA、DHA相近，保留時間位于兩者之間，并且通過不同魚油樣品的分析，試樣中*不含有C23:0，不受試樣中其它組分峰的影響，能滿足準確 測定EPA和DHA的要求。
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